BIỂU HIỆN GEN fliC CẢI BIẾN CỦA Salmonella Dublin VÀ TINH SẠCH FLAGELLIN TÁI TỔ HỢP
Viện Y sinh nhiệt đới, Trung tâm Nhiệt đới Việt - Nga
Số 63 Nguyễn Văn Huyên, Nghĩa Đô, Cầu Giấy, Hà Nội
Số điện thoại: 0982201991; Email: cuongvrtc@gmail.com
Nội dung chính của bài viết
Tóm tắt
EXPRESSION OF MODIFIED fliC GENE FROM Salmonella Dublin AND PURIFICATION OF RECOMBINANT FLAGELLIN
Flagellin is a potent trigger of innate immune responses that enhance adaptive immune responses. Flagellin has intrinsic adjuvant activity mediated through toll-like receptor (TLR 5) and is an attractive candidate for highly effective vaccine adjuvant. The N-terminal D0-D1 domain of flagellin is required for TLR5 recognition. In the present study, fliC gene from S. Dublin expressed in E. coli BL21 in the fusion form with SUMO protein. The 48 kDa fusion protein of SUMO-flagellin was synthesised in insoluble inclusion body. The overall yield of expressed SUMO - flagellin was 0.6 g/L. The recombinant protein solubilized in 2 M urea then was purified by using Ni-NTA column chromatography with purity about 95.4%. Flagellin will be cleaved from fusion protein and used to develop as a radiation countermeasure.
Từ khóa
E. coli Rosetta 1, flagellin, radiation countermeasure, fusion protein, điều trị nhiễm xạ cấp, protein dung hợp
Chi tiết bài viết
Tài liệu tham khảo
2. Song W., Jeon Y., Namgung B. et al., A conserved TLR5 binding and activation hot spot on flagellin, Sci. Rep., 2017, 7:40878.
3. Simon R., Samuel C. E., Activation of NF-B-dependent gene expression by Salmonella flagellins FliC and FljB, Biochem Biophys. Res. Commun., 2007, 355(1):280-285.
4. Hayashi F., Smith K. D., Ozinsky A., Hawn T. R., Yi E. C., Goodlett D. R., Eng J. K., Akira S., Underhill D. M., Aderem A., The innate immune response to bacterial flagellin is mediated by Toll-like receptor 5, Nature, 2001, 410(6832):1099-1103.
5. Jones R. M., Sloane V. M., Wu H., Luo L., Kumar A., Kumar M. V., Gewirtz A. T., Neish A. S., Flagellin administration protects gut mucosal tissue from irradiation-induced apoptosis via MKP-7 activity, Gut., 2011, 60(5):648-657.
6. Thomas Tallant, Amitabha Deb, Niladri Kar, Joseph Lupica, Michael J de Veer and Joseph A DiDonato, Flagellin acting via TLR5 is the major activator of key signaling pathways leading to NF-κB and proinflammatory gene program activation in intestinal epithelial cells, BMC Microbiology, 2004, p.4-33.
7. Skountzou I., Martin M. D., Wang B. Z., Ye L., Koutsonanos D., Weldon W., Salmonella flagellins are potent adjuvants for intranasally administered whole inactivated influenza vaccine, Vaccine, 2010, 28(24):4103-4112.
8. Vijay-Kumar M., Aitken J. D., Sanders C. J., Frias A., Sloane V. M., Xu J., Neish A. S., Rojas M., Gewirtz A. T., Flagellin treatment protects against chemicals, bacteria, viruses, and radiation, J. Immunol., 2008, 180(12):8280-8285.
9. Krivokrysenko V. I., Toshkov I. A., Gleiberman A. S., Krasnov P., Shyshynova I., Bespalov I., Maitra R. K., Narizhneva N. V., Singh V. K., Whitnall M. H., Purmal A. A., Shakhov A. N., Gudkov A. V., Feinstein E., The Toll-like receptor 5 agonist entolimod mitigates lethal acute radiation syndrome in non-human primates, PLoS One, 2015, 10(9):e0135388.
10. Đỗ Thị Huyền, Lê Quỳnh Giang, Sven-Olof Eiifors, Trương Nam Hải, Lựa chọn môi trường nuôi cấy nhằm tăng sản lượng flagellin fliC tái tổ hợp của Salmonella enterica serovar Typhimurium từ Escherichia coli, Tạp chí Công nghệ sinh học, 2012, 10(1):93-98.
11. Trần Thị Bảo Châu, Nguyễn Việt Anh, Trần Văn Hiếu, Tạo dòng, biểu hiện và tinh sạch protein tái tổ hợp FliC của Salmonella enteritidis, Tạp chí Phát triển Khoa học và Công nghệ, 2016, 19(6):62-68.
12. Hayashi F., Smith K. D., Ozinsky A., Hawn T. R., Yi E. C., Goodlett D. R., Eng J. K., Akira S., Underhill D. M., Aderem A., The innate immune response to bacterial flagellin is mediated by Toll-like receptor 5, Nature, 2001, 410(6832):1099-1103.
13. Trương Nam Hải, Salmonella: Kít chẩn đoán và vacxin trên cơ sở protein tái tổ hợp, Nhà xuất bản Khoa học tự nhiên và Công nghệ, Hà Nội, 2011, tr.113-137.
14. Bis R. L., Stauffer T. M., Singh S. M., Lavoie T. B., Mallela K. M., High yield soluble bacterial expression and streamlined purification of recombinant human interferon α-2a, Protein Expr. Purif., 2014, 99:138-46.
15. Malakhov M. P., Mattern M. R., Malakhova O. A., Drinker M., Weeks S. D., Butt T. R., SUMO fusions and SUMO-specific protease for efficient expression and purification of proteins, J. Struct. Funct. Genomics, 2004, 5(1-2):75-86.
16. Lee C. D., Yan Y. P., Liang, S. M., Production of FMDV virus-like particles by a SUMO fusion protein approach in Escherichia coli. J. J Biomed Sci. 2009, 16(1):69.